高速離心機在溫度對提取RNA研究中應用

導讀:核糖核酸（RNA）是部分生物和病毒的遺傳物質，在許多實驗中，RNA的質量對實驗結果有著決定性的影響。本研究上海安亭科學儀器廠采用TRIzol法在不同溫度下提取雞的總RNA，為探究不同

來源：未知發布日期：2020-01-08 11:05【大中小】

在動物組織中進行RNA提取是分子生物學中的基礎實驗技術，而提取RNA的質量將直接影響cDNA文庫的構建、基因克隆、基因表達分析和功能基因篩選等后續結果的可靠性。在提取RNA的過程中RNA的質量受到多個因素的影響，溫度是制約提取RNA質量的重要因素。本實驗上海安亭科學儀器廠采用TRIzol法在不同溫度（2℃、4℃和8℃）條件下提取雞肉RNA，探究不同提取溫度對RNA質量的影響。

將雞進行解剖，將各個組織切割成一定大小后放入研缽中，再加入液氮研磨至粉狀，采集研磨好的冷凍組織到離心管，然后迅速加入1mlBiozolReagent,漩渦充分震蕩30s。保證所有的凝塊全部溶解。冰上靜置5min，再用2℃（上海安亭高速冷凍離心機）/4℃（上海安亭高速冷凍離心機）/8℃（上海安亭高速冷凍離心機），12000rpm離心10min，除去上層油脂，吸取中間層勻漿液轉移至新的離心管中。在離心管中加入1/5體積的氯仿。蓋好蓋，漩渦劇烈震蕩15s，冰上靜置10min。2℃（上海安亭高速冷凍離心機）/4℃（上海安亭高速冷凍離心機）/8℃（高速冷凍離心機），12000rpm離心15min。溶液分為酚氯仿相、中間相和上層水相。RNA溶解在水相中。

轉移不超過80%的水相到一個干凈的離心管，然后加入等體積的異丙醇，漩渦充分震蕩15s，在冰上靜置15min。2℃（上海安亭高速冷凍離心機）/4℃（高速冷凍離心機）/8℃（高速冷凍離心機），12000rpm離心10min，離心后試管底部將出現沉淀。RNA沉淀的清洗：沿管壁輕輕加入1ml75%的乙醇，用手輕輕震蕩離心管洗滌沉淀。在2℃（上海安亭高速冷凍離心機）/4℃（高速冷凍離心機）/8℃（高速冷凍離心機），8000rpm離心5min，棄上清，盡量去除殘留乙醇，這樣可以減少鹽離子污染。

RNA沉淀的清洗：沿管壁輕輕加入1ml75%的乙醇，用手輕輕震蕩離心管洗滌沉淀。7500rpm離心5min，棄上清，盡量去除殘留乙醇，減少鹽離子污染。RNA的溶解：室溫晾干或真空干燥，然后加入30~50μlDEPC水溶解RNA，槍頭吸打幾次，待沉淀完全溶解。將RNA成品分成幾份，放置于-80℃低溫冰箱中做長期保存。

本實驗上海安亭科學儀器廠結果表明，8℃條件下提取的RNA條帶清晰完整，且無拖帶現象出現，而4℃條件下提取的RNA有明顯拖帶現象，2℃條件下提取的RNA已降解。這可能是由于Trizol試劑中的苯酚被氧化后的產物使DNA雙鏈相交聯。溫度過低，讓組織細胞釋放的內源核酸酶活性較低，無法將殘留的DNA降解，而8℃條件下的內源核酸酶能較好的除去殘留DNA，從而得到高品質的RNA。并且紫外分光光度計的結果也驗證了這一結論。綜上所述，在8℃條件下提取出的RNA的質量較高。

關于不同溫度對RNA提取質量的影響，本文上海安亭科學儀器廠就解析到這里，內容僅供參考，歡迎大家到上海安亭科學儀器廠咨詢購買相關產品。

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高速離心機在溫度對提取RNA研究中應用

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